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      日常使用高效液相色譜儀的要求及維護方法
      發布時間:2021-11-24   點擊次數:194次
        日常使用高效液相色譜儀的要求及維護方法,話不多說下面一起來了解一下吧。
       
        一、 流動相的要求
       
        高效液相色譜儀是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的,因此要求流動相具備以下特點:
       
        1、純度 流動相必須用HPLC級的試劑,使用前過濾除去其中的顆粒性雜質和其他物質(使用0.45um或更細的膜過濾)。溶劑所含雜質在柱上積累,會影響色譜柱的使用壽命。
       
        2、溶解度 樣品的溶解度要適宜如果溶解度,如果溶解度欠佳樣品會在柱頭沉淀,不但影響純化分離,還會縮短柱子的使用壽命。
       
        3、粘度要低(應<2cp) 高粘度溶劑會影響溶質的擴散、傳質,降低柱效,還會使柱壓降增加,使分離時間延長。最好選擇沸點在100℃以下的流動相。
       
        4、樣品易于回收。應選用揮發性溶劑。
       
        5、流動相 PH 采用反相色譜法分離弱酸(3≤pKa≤7)或弱堿(7≤pKa≤8)樣品時,通過調節流動相的pH值,以抑制樣品組分的解離,增加組分在固定相上的保留,并改善峰形的技術稱為反相離子抑制技術。
       
        對于弱酸,流動相的pH值越小,組分的k值越大,當pH值遠遠小于弱酸的pKa值時,弱酸主要以分子形式存在;對弱堿,情況相反。
       
        分析弱酸樣品時,通常在流動相中加入少量弱酸,常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液;分析弱堿樣品時,通常在流動相中加入少量弱堿,常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。
       
        二、色譜泵的使用與維護
       
        液相色譜泵的使用和維護注意事項 為了延長泵的使用壽命和維持其輸液的穩定性,必須按照下列注意事項進行操作:
       
        1 防止任何固體微粒進入泵體,因為塵?;蚱渌魏坞s質微粒都會磨損柱塞、密封環、缸體和單向閥,因此應預先除去流動相中的任何固體微粒。流動相最好在玻璃容器內蒸餾,而常用的方法是濾過,可采用Millipore濾膜(0.2µm或0.45µm)等濾器。泵的入口都應連接砂濾棒(或片)。輸液泵的濾器應經常清洗或更換。
       
        2 泵工作時要留心防止溶劑瓶內的流動相被用完,否則空泵運轉也會磨損柱塞、缸體或密封環,最終產生漏液。
       
        3 輸液泵的工作壓力決不要超過規定的最高壓力,否則會使高壓密封環變形,產生漏液。
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